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熒光定量PCR儀使用注意事項
  熒光定量PCR儀可檢測低至1.5倍的基因表達差異。該系統(tǒng)支持廣泛的基因組學(xué)應(yīng)用,例如分析基因表達、microRNA 和非編碼 RNA、拷貝數(shù)變異、藥物代謝酶和蛋白質(zhì)表達、SNP 基因分型以及突變檢測。

 


 
  在使用熒光定量PCR儀時,需要注意以下幾個方面,以確保實驗結(jié)果的準確性和儀器的正常使用:
 
  1. 儀器校準和維護
 
  定期校準:確保儀器在使用前經(jīng)過定期的校準和驗證,以保證數(shù)據(jù)的準確性。
 
  維護保養(yǎng):定期清潔光學(xué)系統(tǒng)和樣品倉,保持設(shè)備內(nèi)部清潔,避免污染,影響測量精度。
 
  檢查反應(yīng)板:確保反應(yīng)板無損壞,且孔位正確,避免影響反應(yīng)效率。
 
  2. 試劑準備
 
  避免污染:在操作時要特別注意避免樣本、試劑和儀器的交叉污染。最好在無菌條件下操作,并使用專用的移液器。
 
  試劑的保存和使用:根據(jù)試劑的要求保存,避免過期或保存不當導(dǎo)致試劑活性降低,影響PCR效果。
 
  反應(yīng)體系優(yōu)化:使用合適的緩沖液、引物、探針等,并根據(jù)實驗需要進行優(yōu)化。
 
  3. 樣品和引物設(shè)計
 
  引物設(shè)計:確保引物特異性高,避免二聚體或發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成,減少非特異性擴增。
 
  樣品濃度:確保模板DNA或RNA的濃度在儀器檢測的最佳范圍內(nèi),避免過高或過低濃度影響結(jié)果。
 
  4. 反應(yīng)條件設(shè)置
 
  程序設(shè)定:根據(jù)實驗?zāi)繕诉x擇合適的循環(huán)程序,優(yōu)化退火溫度、擴增時間和反應(yīng)體系,以獲得最佳的擴增效果。
 
  反應(yīng)體系:確保每個反應(yīng)管內(nèi)的成分、體積都準確無誤。最好使用試劑盒推薦的配方。
 
  5. 數(shù)據(jù)分析
 
  熒光信號監(jiān)控:實時監(jiān)控熒光信號的變化,確保在適當?shù)难h(huán)次數(shù)后開始采集數(shù)據(jù),避免過早或過晚的數(shù)據(jù)采集影響結(jié)果。
 
  參考基因選擇:選擇合適的內(nèi)參基因進行數(shù)據(jù)歸一化,以消除樣品間的差異。
 
  標準曲線:建立標準曲線時,確保不同濃度的標準品均勻分布,以確保結(jié)果的可靠性。
 
  6. 實驗環(huán)境
 
  溫度控制:確保實驗環(huán)境溫度適宜,避免高溫或低溫影響試劑或樣品的穩(wěn)定性。
 
  儀器穩(wěn)定性:操作過程中盡量避免劇烈震動,避免影響PCR儀器的穩(wěn)定性和準確性。
 
  7. 常見問題排查
 
  無擴增或信號過低:檢查樣品質(zhì)量、引物設(shè)計、反應(yīng)體系和儀器設(shè)置。
 
  非特異性擴增:調(diào)整退火溫度,優(yōu)化引物濃度,檢查樣品的純度。
 
  通過注意以上事項,可以提高熒光定量PCR實驗的成功率和數(shù)據(jù)的可靠性。

上海睿玥實驗器材有限公司主營產(chǎn)品:全自動熔點測定儀,梯度PCR基因擴增儀,平行反應(yīng)合成儀
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