動(dòng)物源性DNA檢測(cè)試劑盒需要嚴(yán)格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求在冰盒上操作。
反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感,應(yīng)避光保存。試劑使用前要*解凍,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,推薦使用前離心30秒,并按檢測(cè)頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄,當(dāng)日清理,開(kāi)蓋易造成氣溶膠污染,禁止開(kāi)蓋。
建議使用試劑配套動(dòng)物基因組DNA提取系列產(chǎn)品,具體過(guò)程詳見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。剪下所需測(cè)試數(shù)的已含有反應(yīng)液的PCR管,放置在室溫待解凍后,離心30秒后揭開(kāi)封口膜,向每管反應(yīng)液中分別加入5μL模板,順序?yàn)镹G、待測(cè)樣品模板。蓋好配套的PCR管蓋后,渦旋混勻30秒,離心1分鐘,立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
需要按試劑準(zhǔn)備中描述的方法,配制好
動(dòng)物源性DNA檢測(cè)試劑盒各種組分的工作液。
所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫,標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品,建議做復(fù)孔。
從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,樣本孔加待測(cè)樣本50μL,空白孔不加。
用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。
除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,加入過(guò)氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL。
揭開(kāi)封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置20s,甩去洗滌液,吸水紙上拍干。
將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL,用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15分鐘;
如此重復(fù)4次,若使用自動(dòng)洗板機(jī),請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板,添加浸泡20秒的程序,可以提高檢測(cè)的精度。洗板結(jié)束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應(yīng)板。